CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE UM INIBIDOR DE TRIPSINA ISOLADO DE SEMENTES DE SALVIA HISPANICA L. (CHIA)
Resumo
Inibidores de proteases são moléculas presentes em microrganismos, plantas e animais, cujo potencial farmacológico tem sido amplamente explorado. Previamente, nosso grupo de pesquisa otimizou o protocolo de purificação de um inibidor de tripsina presente em sementes de Salvia hispanica L. (chia), denominado ShIT (10.152 Da). No entanto, sua caracterização físico-química não havia sido estudada. Assim, o objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular de ShIT. ShIT foi purificado a partir do extrato proteico das sementes de chia obtido usando Tris-HCl 50 mM, pH 8,0, contendo NaCl 500 mM, seguido de aquecimento (100 °C; 30 min), e cromatografias de afinidade em matriz de Sepharose CNBr 4B com tripsina imobilizada e de fase reversa em matriz C-18. Esse inibidor mostrou-se estável à temperatura (100 °C; 2h) e pH (2,0 – 10,0; 30 min). No entanto, na presença de DTT (100 mM; 2 h) e dos íons metálicos Ni2+ e Fe3+ (30 min), houve perda significativa (p < 0,05) de sua atividade inibitória de tripsina em 40%, 50% e 70 %, respectivamente. Em estudos de cinética enzimática, ShIT exibiu uma IC 50 de 0,24 µM e uma razão estequiométrica de inibição de 1:1 (tripsina/ShIT). Ademais, gráficos de Lineweaver–Burk e de Dixon foram plotados, sendo determinada uma inibição não competitiva sobre tripsina bovina e constante de inibição (Ki) de 0,22 µM. Estudos posteriores serão realizados com vistas à elucidação de aspectos estruturais de ShIT, bem como de seu potencial biotecnológico.Publicado
2019-01-01
Edição
Seção
XII Encontro de Pesquisa e Pós-Graduação
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