AVALIAÇÃO DA FORMAÇÃO DE BIOFILME DE CLOSTRIDIUM DIFFICILE POR CEPA ISOLADA DO CEARÁ, BRASIL (ICC-45) E COMPARAÇÃO COM BIOFILME DA CEPA HIPERVIRULENTA NAP1 / 027

Resumo

O desafio do tratamento do Clostridium difficile é a maior recorrência dessa bactéria, que pode estar associada à capacidade de produzir biofilme. Testaram-se 4 cepas: ATCC 70057, NAP1 / 027 (LIBA5756), ICC-45 e R20291 para avaliar sua capacidade de formar biofilme in vitro. A quantidade total de biomassa de biofilme nas 24, 48, 72 e 120h foi estimada pela coloração por violeta de cristal. A absorbância foi medida pelo espectrofotômetro a OD570nm. As cepas foram classificadas em três grupos: baixo biofilme (OD570 <1.1), biofilme moderado (1.1 <OD570 <3.5) e alto biofilme (OD570> 3.5). A avaliação da espessura da matriz do biofilme foi realizada por microscopia confocal usando a coloração da matriz de biofilme Film Tracer Ruby. Excitação 488/561 nm, emissão 500-550 / 570-620 nm. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando o GraphPad Prism. As diferenças foram significantes em p <0,05. Resultados: As diferentes linhagens de C. difficile exibiram formação de biofilme nas 24, 48 e 72h. Em 48h, as cepas ICC-45 e NAP1 / 027 (LIBA5756) cresceram à medida que os formadores de biofilme mais altos tinham um OD570> 3,5 médio e a cepa ATCC 700057 cresceu como um biofilme médio com um OD570 médio = 2,9. Por outro lado, após 120 h de incubação, observou-se uma redução da biomassa do biofilme, ICC-45 e NAP1 / 027 (LIBA5756) formando biofilme moderado com um OD570 = 2,08 e DO570 = 3,02, respectivamente. Os resultados da microscopia demonstram que em 48h a espessura da matriz de biofilme formada por R20291 foi significativamente maior que ICC-45 e NAP1 / 027 (LIBA5756), no entanto, em 120h, ICC-45 e NAP1 / 027 (LIBA5756) produziram uma matriz semelhante, e ambas as cepas exibiram uma espessura da matriz significativamente maior que R20291. Conclui-se que a cepa ICC-45 é uma cepa formadora de biofilme competente. O biofilme formado pelo ICC-45 não diferiu do NAP1 / 027 (LIBA5756), indicando seu potencial de causar infecção por Clostridium difficile e induzir recorrência.