PROTOCOLO DE EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DA BIOMASSA DA MICROALGA CHLORELLA VULGARIS

Abstract

Microalgas são seres eucarióticos unicelulares e fontes de biomoléculas de largo interesse biotecnológico, incluindo proteínas e peptídeos. Os protocolos de extração de proteínas de microalgas são heterogêneos e variam de acordo com o tipo de amostras e a finalidade. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência de um protocolo de extração de proteínas da biomassa seca de Chlorella vulgaris. 4 g de biomassa foram adicionados a 20 mL de água ultrapura na proporção 1:5 (m/v), homogeneizados e submetida a três ciclos de congelamento e descongelamento a -20 ºC seguido de 100 ciclos de ultrassonicação (com duração 10 segundos e intervalos de 5 segundos cada) sob refrigeração em ultrassonicador com amplitude ajustada em 30%. A mistura foi colocada em tubo plástico de 50 mL com 10 pérolas de vidro e agitada vigorosamente em vórtex por 30 minutos. Por fim, a amostra foi centrifugada a 14000 rpm por 45 minutos a 5 ºC e o sobrenadante foi coletado e filtrado obtendo-se, assim, o extrato aquoso bruto total (EBt). O EBt foi submetido a precipitação por sulfato de amônio para separação das frações 40-60 e 60-80. As amostras foram submetidas à quantificação de proteínas pelo método BCA (Ácido Bicinconínico), para o qual foram preparadas em 3 diluições (1x, 5x e 10x diluídas), e análise eletroforética por SDS-PAGE sob condição redutora. Embora 10x diluído, o EBt apresentou alta absorbância e concentração muito acima da faixa de sensibilidade do método BCA (200 - 1000 µg/mL), não sendo possível quantificar a concentração real de proteínas da amostra na diluição analisada. As frações F40-60 e F60-80 apresentaram ~1000 µg/mL e 516 µg/mL, respectivamente. O EBt apresentou grupo de bandas proteicas com peso molecular estimado variando entre 6,5 a >60 KDa. As frações proteicas apresentaram bandas bem definidas com peso molecular variando de <6,5 Kda a >60 KDa. O protocolo utilizado mostrou eficiência para extração de grande quantidade de proteínas da biomassa de Chlorella vulgaris.